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医疗实验 News
在医学实验中也有实例证明MAC的有效性。关于小鼠ES细胞在添加有MAC的培养基中的细胞增值率的解析说明 准备0.1% 明胶包被96孔平底板,分别以1well 10000细胞和2000细胞的方式进行接种小鼠ES细胞。重新接种时一般需要更新普通维持培养基。重新接种的第二天,用和更换培养基时同样的方法开始进行药物暴露。 培养基在第一天和第二天两次进行更换(测定当日不更换)。 测定时将CCK混合入新鲜的普通维持培养基中,CCK为100μl/well,开始反应之后,根据反应的培养基读取时间进程进行测定。 ※由于CCK反应与细胞密度有关,因此事先要拍照解析前的细胞密度、进行预测的阶段时,在通过比较稀释数据后确定的必须解析的时间带的前后进行预测。 第一次的AP试验中,重新接种的细胞数为10000细胞和2000细胞,次日观察细胞时观察到的菌落群比预期的要多。第二次的AP试验中,重新接种的细胞数以5000细胞和1000细胞进行试验。第一次的试验中进行3天药物暴露、第二、三次试验中均进行2天药物暴露。 在上记中独立进行的三次实验中,对照反应的2小时和4小时的场合都是,将MAC添加培养基中培育的细胞数有意接种的比DW(蒸馏水)添加培养基中培育的细胞数要多(表1)。 细胞数比例为,相对与重新接种以10000或5000细胞培育生...
发布时间: 2016 - 06 - 03
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培养方法胚胎鼠纤维芽细胞(MEF细胞)加入10μg/ml丝裂霉素处理。MEF细胞播撒30×104细胞,做为供给细胞。将冷冻的小鼠iPS细胞用液氮唤醒,进行3代以上换代后再进行本实验。次日,在供给细胞上撒上小鼠iPS细胞约100细胞/mm2。播撒小鼠iPS细胞的次日开始进行药物实验,实验期间的细胞最终形成融合状态(3-6日内)。实验期间中,每天都需更换和调整2种种类的培养基。 实验結果価  使用在粉末培养基的溶剂中添加MAC的培养基的场合,能够用肉眼观察到细胞数量的增加( 图1)。而且,在进行维持培养了3-5天的细胞数的计数时,可以观察到在MAC添加培养基中必然的细胞数增加( 图2a, b)。另一方面,用打上了未分化的绿色荧光蛋白( GFP)标记的小鼠iPS细胞观察维持培养了5天的MAC添加培养基中培育的细胞群时,在细胞群的广范围内都发现了( GFP)( 图3)。通过这个结果可以明确知道,使用MAC添加溶剂与DW添加溶剂相比,细胞数有明显的增加。而且,基于添加MAC所增加的细胞群,从观察维持培养了5天荧光标记也喂分解的情况可知,MAC存在在维持多分化能力的状态下,迅速使iPS细胞增值能力的可能性。图2 DW和MAC添加培养基中培养3-5天的小鼠iPS细胞细胞数的比较图3   用打上了未分化的绿色荧光蛋白标记的小鼠iPS细胞观察到G...
发布时间: 2016 - 06 - 03
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关于投入MAC的小鼠免疫细胞增值率的解析(1) 培养方法准备SD公鼠( 12周)作为实验动物。投给小鼠MAC的方法有口服和注射到腹腔内两种方法。口服的MAC是经过0,22μm过滤灭菌的。另一方面,在对照的实验群中投入配置好的DW,注射到腹腔内的则准备相对与10×PBS稀释一倍的MAC和培养用的DW。每日两次(早、晚)更换水和注射。 実験期間实施期间 实验开始3天后和7天后分别进行评测。每次评测都需比较对照群(n=2)和实验群(n=2)。   实验方法 小鼠心脏采血(4ml),血液注入15ml的软管中。在软管中加入1/5 倍量的HetaSep(800μl),混合后进行孵化(37℃, over 2h)。之后能观察到红血球层的分离。2小时后,由于淋巴球成分在软管管壁处凝固,红血球成分在软管中央处凝固,这时,吸液管中大约有2ml的淋巴球成分分离出来了。之后将淋巴球成分以每15ml软管中2ml/sample的方式回收,并离心(3,000 rpm, 8 min, RT)。 以30μl/sample 加入PBS( 磷酸盐缓冲液)进行调整后,分别以30μl/tube注入各软管中,剩下的部分用于对照群中。将IOTest(30μl)加入各软管,移液(Sample:IOTest = 1:1)操作之后,以20min/...
发布时间: 2016 - 06 - 07
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