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医疗实验 News

实验一:【ES细胞1.5倍增殖!】

日期: 2016-06-03
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在医学实验中也有实例证明MAC的有效性。

关于小鼠ES细胞在添加MAC的培养基中的细胞率的解析说明

 

准备0.1% 明胶包被96孔平底板,分别以1well 10000细胞和2000细胞的方式进行接种小鼠ES细胞。重新接种时一般需要更新普通维持培养基。重新接种的第二天,用和更换培养基时同样的方法开始进行药物暴露。

 

培养基在第一天和第二天两次进行更换(测定当日不更换)。

 

测定时将CCK混合入新鲜的普通维持培养基中,CCK为100μl/well,开始反应之后,根据反应的培养基读取时间进程进行测定。

 

※由于CCK反应与细胞密度有关,因此事先要拍照解析前的细胞密度、进行预测的阶段时,在通过比较稀释数据后确定的必须解析的时间带的前后进行预测。

 

第一次的AP试验中,重新接种的细胞数为10000细胞和2000细胞,次日观察细胞时观察到的菌落群比预期的要多。第二次的AP试验中,重新接种的细胞数以5000细胞和1000细胞进行试验。第一次的试验中进行3天药物暴露、第二、三次试验中均进行2天药物暴露。

 

在上记中独立进行的三次实验中,对照反应的2小时和4小时的场合都是,将MAC添加培养基中培育的细胞数有意接种的比DW(蒸馏水)添加培养基中培育的细胞数要多(表1)。

 

细胞数比例为,相对与重新接种以10000或5000细胞培育生成的平均约菌群1.35,重新接种以5000或1000细胞培育生成的平均约菌群1.55要更多些(图1)。重新接种以10000或5000细胞培育生成的菌群,由于在进行解析时,MAC和DW添加培养基中培育的两个细胞群中的细胞数都已达到饱和状态,因此有无法获得明确的实验结果的可能性存在。另一方面,重新接种以5000或1000细胞培育生成的菌群,由于两个细胞群并未达到饱和状态,因此能够获得稳定的MAC添加的菌群的高数值。

 


图片5.png

M C P 添加培地中でのマウス ips 細胞の増殖率に関する解析

图1   对照反应2小时、4小时里DW及MAC添加培养基中培育生成ES细胞数的比较图(假设DW添加培养基中的值为1)

以5000或1000细胞接种                                以10000或5000细胞接种



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