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医疗实验 News

实验二:【ips细胞2倍增殖!】

日期: 2016-06-03
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培养方法

胚胎鼠纤维芽细胞(MEF细胞)加入10μg/ml丝裂霉素处理。

MEF细胞播撒30×104细胞,做为供给细胞。将冷冻的小鼠iPS细胞用液氮唤醒,进行3代以上换代后再进行本实验。次日,在供给细胞上撒上小鼠iPS细胞约100细胞/mm2。播撒小鼠iPS细胞的次日开始进行药物实验,实验期间的细胞最终形成融合状态(3-6日内)。实验期间中,每天都需更换和调整2种种类的培养基。

 

实验結果

価  

使用在粉末培养基的溶剂中添加MAC的培养基的场合,能够用肉眼观察到细胞数量的增加( 图1)。而且,在进行维持培养了3-5天的细胞数的计数时,可以观察到在MAC添加培养基中必然的细胞数增加( 图2a, b)。另一方面,用打上了未分化的绿色荧光蛋白( GFP)标记的小鼠iPS细胞观察维持培养了5天的MAC添加培养基中培育的细胞群时,在细胞群的广范围内都发现了( GFP)( 图3)。通过这个结果可以明确知道,使用MAC添加溶剂与DW添加溶剂相比,细胞数有明显的增加。而且,基于添加MAC所增加的细胞群,从观察维持培养了5天荧光标记也喂分解的情况可知,MAC存在在维持多分化能力的状态下,迅速使iPS细胞增值能力的可能性。

2 DWMAC添加培养基中培养3-5天的小鼠iPS胞数的比

图3   用打上了未分化的绿色荧光蛋白标记的小鼠iPS细胞观察到GFP(培养第5天)  小鼠iPS细胞培养第3天观察     未分化标记

4  在DWMAC添加培养基中诱导分化15天的


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