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医疗实验 News

实验三:【免疫细胞 2.3倍增殖!】

日期: 2016-06-07
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关于投入MAC小鼠免疫率的解析(1)

 

方法

准备SD公鼠( 12周)作为实验动物。投给小鼠MAC的方法有口服和注射到腹腔内两种方法。口服的MAC是经过0,22μm过滤灭菌的。另一方面,在对照的实验群中投入配置好的DW,注射到腹腔内的则准备相对与10×PBS稀释一倍的MAC和培养用的DW。每日两次(早、晚)更换水和注射。

 実験期間

实施期间

 

实验开始3天后和7天后分别进行评测。每次评测都需比较对照群(n=2)和实验群(n=2)。  

 

实验方法

 

小鼠心脏采血(4ml),血液注入15ml的软管中。在软管中加入1/5 倍量的HetaSep(800μl),混合后进行孵化(37℃, over 2h)。之后能观察到红血球层的分离。2小时后,由于淋巴球成分在软管管壁处凝固,红血球成分在软管中央处凝固,这时,吸液管中大约有2ml的淋巴球成分分离出来了。之后将淋巴球成分以每15ml软管中2ml/sample的方式回收,并离心(3,000 rpm, 8 min, RT)。

 

以30μl/sample 加入PBS( 磷酸盐缓冲液)进行调整后,分别以30μl/tube注入各软管中,剩下的部分用于对照群中。将IOTest(30μl)加入各软管,移液(Sample:IOTest = 1:1)操作之后,以20min/RT进行抗体反应,使用FACS 缓冲液(1×)洗净,离心(3,000 rpm, 5 min, RT)。去除上清液后,在遮光环境下加入VersaLyse溶血试药(500μl/tube),再加入PBS静置10min。最后,进行总细胞数技术及基于FACS的免疫细胞比例计测。

 

实验結果

 

 FACS解析的结果如图1所示。如图2所示,投入MAC的实验群跟投入DW的对照群进行比较对比后,发现观察到的MAC实验群中的T细胞、B细胞、NK细胞全都比对照群中的增加得更多。各种细胞的细胞数增加率虽没有太大的差别,但其中,有MAC投入的实验群中的B细胞的细胞数增加率却是相对显著的。

图片11.png

 

2  基于IOTest的DW投入小鼠和MAC(0,45μ过滤灭菌前)投入小鼠之间的淋巴球内各胞数的比

设DW投入小鼠的数值为1


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