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医疗实验 News

实验五:【APT产生活性1.4倍以上!】

日期: 2016-06-07
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关于在施加酸化下,MAC添加培养基中培的小鼠血管内上皮胞株( M A E C )ATP量的解析

 

为了确认MAC在处于酸化环境下的MAEC细胞的线粒体机能中发挥的作用,进行了一系列关于细胞内ATP产生的研究。

 

与上次实验同样,分别准备MAC、纳米泡沫、富氢水添加制作的培养基来培养MAEC细胞。全部培养基加入MAEC细胞后先静置培养24小时,之后各自更换新鲜水制作的培养基后再培养2小时。然后,将50μg/ml抗霉素、0.06v/v%酒精、500μmol/L过氧化氢分别添加到各个培养基中。

 

并使用广泛用于活性酸种的抗酸化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)做为抗酸化作用的对照组。

 

做抗酸化作用的对照用培养基使用普通的水制作。用此培养基静置培养MAEC細胞24小时后,更换新鲜的培养基后再培养2小时。在添加酒精或过氧化氢处理的30分钟前,先添加NAC使之浓度达到5mmol/L。最后,根据荧光素酶报告基因活性指标测定细胞内的ATP量变化(ATP lite, Parkin Elmer)。

 

图片16.png

细胞内的ATP量测定结果如图1所示。纳米泡沫添加培养基培养的细胞,不管是酒精处理、抗霉素处理还是过氧化氢处理后产生的ATP量都要比无刺激的情况下要低。结果表明,酒精、抗霉素、过氧化氢都是对ATP产生活性有抑制效果的。

 

观察发现抗霉素处理培养基培养的细胞比过氧化氢处理培养基培养的细胞中ATP产生活性要明显下降的多。而使用富氢水和MAC添加培养基培养的细胞,无论进行什么处理细胞的ATP产生活性都是增加的。也就是说,富氢水和MAC对于由抗霉素等引起的ATP产生活性的抑制,有与抗酸化剂NAC同等程度甚至以上程度地降低抑制的作用。而且,MAC在酒精或过氧化氢处理的情况下,要比富氢水更高程度地降低ATP产生活性的抑制作用。

 

图1 ATP活性

吸光度  

纳米泡沫  富氢水 MAC 抗酸化剂NAC

无刺激  酒精  抗霉素  过氧化氢

 


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